Zika病毒NS3具有依赖于ATP水解的dsDNA解链活性

• 作者: 徐杉 王蕾杰 石磊
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 生物学
• 关键词: Zika病毒 NS3蛋白 ATP dsDNA 解旋酶
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 674-678
• 页数: 5页
• 分类号: Q71
• 字数: 2901字
• 语种: 中文

摘要

目的 研究Zika病毒NS3蛋白是否具有依赖于ATP水解的dsDNA解链活性.方法 构建原核表达载体,在大肠杆菌BL21菌株中表达带有His标签的Zika NS3蛋白,并用Ni琼脂糖珠进行纯化;利用ATPase检测试剂盒对NS3的ATP水解活性进行检测;利用荧光共振能量转移(FRET)原理,对NS3的dsDNA解链活性进行实时动力学检测;利用定点突变方法将NS3蛋白的第198位甘氨酸(G)突变为丙氨酸(A),得到G198A突变体,检测其是否影响NS3解旋酶活性.结果 Zika NS3蛋白在体外可以水解ATP,酶解最大反应速率为2.76 μmol/(L· min),Km值为0.11 mmol/L;Zika NS3蛋白在体外可以解链dsDNA;G198A突变体与野生型相比,ATP水解速率和dsDNA的解链速率均明显减弱.结论 Zika NS3蛋白在体外具有ATP水解活性以及dsDNA解链活性,且第198位甘氨酸对于NS3酶活性至关重要.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐杉	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
2	王蕾杰	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室	1	0	0.0	0.0
3	石磊	中国医学科学院基础医学研究所北京协和医学院基础学院生物化学与分子生物学系医学分子生物学国家重点实验室	6	9	2.0	3.0