基于溶胶-凝胶包埋的蛋白磷酸酶抑制比色法快速检测腹泻性贝类毒素

• 作者: 吴海燕 姚琳 牟海津 翟毓秀 谭志军 郑关超 郭萌萌 陈佳琦
• 来源期刊: 分析化学
• 关键词: 腹泻性贝类毒素 蛋白磷酸酶抑制比色法 溶胶-凝胶 贝类 快速检测
• 年，卷（期）: 2018,（8）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1261-1268
• 页数: 8页
• 字数: 5130字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11895/j.issn.0253-3820.171529

摘要

基于腹泻性贝类毒素(Diarrhetic shellfish poisoning,DSP)的主要成分大田软海绵酸(Okadaic acid,OA)及其衍生物对蛋白磷酸酶2A(Protein phosphatase 2A,PP2A)的抑制作用,采用改进的溶胶-凝胶(Sol-gel)技术包埋PP2A,建立了快速测定贝类中DSP的新方法.以对硝基苯磷酸二钠(4-Nitrophenyl phosphate disodium,p-NPP)为底物,利用碱性条件下PP2A催化p-NPP产生的黄色水解产物对硝基苯酚(4-Nitrophenol,p-NP)在405nm处具有强烈吸收峰,而OA及其衍生物对PP2A的抑制会减少p-NP的生成,由此建立剂量-反应关系实现对DSP定量检测.本方法基于Sol-gel技术包埋PP2A,引入D-葡萄糖增大酶凝胶微孔的孔径,添加羟乙基纤维素防止酶凝胶发生脆裂,提高和保持酶的活性及稳定性,从而改善蛋白磷酸酶抑制比色法的重现性和可靠性.本方法的检出限为50μg OA eq./kg贝组织,线性范围为50～800μg/kg;加标回收率在68.8％～119.4％之间,相对标准偏差(RSD)为5.5％～14.8％.本方法将PP2A包埋固定于微孔板底部,可在-18℃条件下保持酶活性4个月以上,使用时直接加入底物和样品溶液进行反应,省去了传统PP2A抑制比色法中每次测试需重新配制酶溶液并进行水解等预处理步骤,使DSP的检测更简便、高效.