小鼠LSK及DN原代细胞中基因编辑方法的建立

• 作者: Avinash Bhandoola 王跃强
• 来源期刊: 生物技术通报
• 关键词: 小鼠 免疫 干细胞 基因编辑 CRISPR/Cas9
• 年，卷（期）: 2018,（5）
• 所属期刊栏目: 基因编辑专题
• 页码范围: 64-70
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2017-0903

摘要

小鼠(Mus musculus)免疫系统包含种类众多、功能各异的细胞群体.为了研究小鼠免疫系统的发育机制,需要建立高效的遗传操作技术方法.首先选择Cas9敲入小鼠的DN细胞(CD4-CD8-double negative thymocytes)为研究对象,针对GFP和CD4表面抗原基因设计构建了sgRNA(single guide RNA),使用小鼠逆转录病毒(Murine stem cell virus,MSCV)为载体实施了基因编辑.通过流式细胞仪分析,检测到GFP和CD4被成功敲除.在此基础上,选取Cas9敲入小鼠的LSK细胞(Lin-Sca1+Kit+)为研究对象,使用同样的方法针对Tcf7基因设计构建了sgRNA并实施基因编辑.基因编辑后,LSK细胞不能正常分化为下游T细胞,但其分化为髓系细胞能力不受影响.这些结果表明,针对小鼠LSK和DN原代细胞实施的基因编辑取得成功.