CD163双等位基因编辑猪的制备及传代

• 作者: Evanna Huyhn Julang Li Paul Dyce 冯保亮 刘志国 周伟良 徐奎 李奎 李继良 牟玉莲 董树仁 魏迎辉
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: CD163 CRISPR/Cas9 猪 猪繁殖与呼吸综合征
• 年，卷（期）: 2018,（4）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·资源昆虫
• 页码范围: 770-777
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2018.04.016

摘要

[目的]猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS),俗称“蓝耳病”,是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)引起的一种高致死性传染病,对世界养猪业造成了巨大的经济损失.由于PRRSV遗传变异性较大,因此国内外并未有理想疫苗能够对此病进行有效防制.Cluster of differentiation 163 (CD163)是PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(porcine alveolar macrophage,PAM)的受体之一,研究旨在利用CRISPR/Cas9技术结合体细胞核移植技术制备CD163基因编辑的大白猪.[方法]针对猪CD163基因的第7外显子设计构建CRISPR/Cas9基因编辑载体;转染大白猪胎儿成纤维细胞,获得基因编辑阳性细胞克隆;以基因编辑细胞为核供体、体外成熟的猪卵母细胞为核受体构建克隆胚胎;胚胎移植到受体母猪生产CD163基因编辑猪,并进行后续的扩繁试验.[结果]设计的gRNA能够高效的识别靶位点.对获得的127个细胞单克隆进行PCR和测序显示,共有21个克隆发生突变,其中14个克隆为单等位基因突变或双等位基因杂合突变,7个克隆为双等位基因纯合突变.通过体细胞核移植技术,成功获得了CD163双等位基因编辑的纯合大白猪;并获得首批F1代CD163基因编辑仔猪,目前健康状态良好.随后将有更多的F1代CD163基因编辑猪陆续出生.[结论]制备的无抗性筛选标记的CD163双等位基因编辑猪,能够安全并快速地为培育抗PRRSV新品种猪提供育种材料.