特异性扩增技术鉴定龟甲与鳖甲

• 作者: 李楠 杨欢 沈玉萍 焦兆群 蔡宝昌 虞平添 郑阳 陈立群 陈红杰 黄学贵
• 来源期刊: 中成药
• 学科: 医学
• 关键词: 龟甲 鳖甲 掺伪 特异性扩增
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 科研报道
• 页码范围: 2328-2333
• 页数: 6页
• 分类号: R284.1
• 字数: 4046字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-1528.2018.10.046

摘要

目的 基于特异性扩增建立动物药龟甲与鳖甲的真伪鉴定技术.方法 根据龟甲与鳖甲及3种常见伪品的全基因组序列的差异设计了5对特异性引物(PCR、PTS、PMS、PPS、PAF),采用SDS法、酚仿抽提法从龟甲与鳖甲中提取与纯化DNA,并通过聚合酶链式反应(PCR)对目标片段进行扩增,产物以琼脂糖凝胶电泳分析及凝胶成像系统检测,并根据电泳条带的有无及分子量大小以鉴定真伪.结果 龟甲与鳖甲及其常见伪品巴西龟、花龟、佛罗里达鳖的DNA经扩增后分别在120、120、81、105、114 bp处产生条带,且引物间无交叉反应,体现出很强的专属性,5个物种DNA的检出限为1 ng.自制药材、饮片、掺伪品均扩增出与目的片段相一致的条带.在市售样品中,18批龟甲和20批鳖甲经鉴定为正品,2批龟甲药材经鉴定为来源于巴西龟的伪品.结论 本文所建立的技术可准确、快速地鉴定龟甲与鳖甲的真伪,有助于监控其产品质量.