鸡源细菌中5种四环素耐药基因多重PCR 检测方法的建立

• 作者: 冯博 周昌艳 林淼 白亚龙 白龙 索玉娟 邵毅 黄柳娟
• 来源期刊: 食品与机械
• 关键词: 鸡源细菌 四环素耐药基因 多重聚合酶链式反应 快速检测
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 安全与检测
• 页码范围: 55-59,90
• 页数: 6页
• 字数: 4692字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13652/j.issn.1003-5788.2018.10.011

摘要

为建立一种同步检测鸡源细菌中5种四环素耐药基因tetA、tetD、tetG、tetS和tetX的多重聚合酶链式反应(PCR)方法,优化了多重PCR体系的引物和Taq DNA聚合酶浓度及退火温度等参数,并考察了方法的灵敏度、特异性和适用性.建立的多重PCR反应技术的最佳反应体系为:混合DNA模板5μL,Taq酶1μL,tetA和tetX的正反向引物各0.5μL,tetG、tetD和tetS的正反向引物各1.0μL,dNTP 4μL,MgCl24μL,10×PCR反应缓冲液5μL,最终用dd H2 O补齐至50μL;反应程序为:95℃预变性5 min;95℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,35个循环;72℃延伸10 min.该方法的灵敏度为102 CFU/mL,且能广谱地检测多种鸡源细菌中的5种四环素耐药基因.与传统的单重PCR方法相比,该多重PCR技术快速高效、适用性广.