构建靶向Runx2基因成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体

• 作者: 徐宏志 秦晗 龚永庆
• 来源期刊: 中国组织工程研究
• 学科: 医学
• 关键词: 组织构建 Runx2基因 MC3T3-E1细胞 慢病毒 转染
• 年，卷（期）: 2018,（28）
• 所属期刊栏目: 骨组织构建
• 页码范围: 4429-4433
• 页数: 5页
• 分类号: R318
• 字数: 4658字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4344.0951

摘要

背景:研究表明成骨细胞特异性转录因子(Runx2)的杂合突变、基因插入、缺失等是造成颅骨锁骨发育不全的重要原因.目前关于Runx2基因沉默后成骨细胞功能会发生怎样的变化,及如何沉默成骨细胞Runx2基因表达的相关研究未见报道.目的:构建靶向Runx2基因的小鼠成骨样细胞MC3T3-E1慢病毒载体,为颅骨锁骨发育不全的研究提供实验依据.方法:根据预实验结果在含5 mg/L Polybrene的ENi.S培养液中,病毒按MOI=40进行感染,按病毒序号分为4组:NC组:pFU-GW-016PSC53349-1;KD1组:LVpFU-GW-016PSC60107-1;KD2组:LVpFU-GW-016PSC60108-1;KD3组:LVpFU-GW-016PSC60109-1.转染后16 h换液,72 h后,Celigo全视野细胞扫描分析仪观察检测基因的表达情况;两步法进行Real-Time PCR检测Runx2基因的沉默效果.结果与结论:①病毒转染后72 h,NC组未见荧光表达;KD1组可见少量荧光表达;KD2组荧光表达增强;KD3组可见强绿色荧光;②Real-Time PCR结果提示KD3组获得较好Runx2基因沉默效果;③实验成功构建靶向Runx2基因的MC3T3-E1细胞慢病毒载体,筛选出特异性抑制成骨细胞Runx2基因的病毒,并初步确定其作用的时间、相应的计量.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	秦晗	徐州医科大学附属连云港医院口腔科	5	2	1.0	1.0
2	徐宏志	徐州医科大学附属连云港医院口腔科	4	2	1.0	1.0
3	龚永庆	徐州医科大学附属连云港医院口腔科	3	2	1.0	1.0