过表达三突变型低氧诱导因子1α重组人脐静脉内皮细胞株的构建及鉴定

• 作者: 李慧 李桥川 杨鹏程 韦莉莉
• 来源期刊: 广西医学
• 学科: 医学
• 关键词: 低氧诱导因子1α 三突变 过表达 慢病毒载体 人脐静脉内皮细胞
• 年，卷（期）: 2018,（11）
• 所属期刊栏目: 论著·基础研究
• 页码范围: 1224-1227
• 页数: 4页
• 分类号: R34
• 字数: 4214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11675/j.issn.0253-4304.2018.11.20

摘要

目的 构建并鉴定过表达三突变型低氧诱导因子 1α ( HIF-1α)重组人脐静脉内皮细胞株 EA. hy926.方法 根据原有质粒pcDNA3. 1 +-HIF1-Ala402-Ala564-Ala803的HIF-1α三突变基因序列设计引物,经PCR扩增后连接至入门载体,将含有目的基因的入门载体与pT590质粒及pENTR_L4_PCMV_R1质粒拼接为三突变型HIF-1α重组慢病毒载体,将该载体转化至DH5α感受态细胞,挑选阳性的克隆测序鉴定.将三突变型HIF-1α重组慢病毒载体与辅助包装质粒共转染人胚肾细胞系HEK293T细胞,收集病毒液.将EA. hy926细胞分为感染重组HIF-1α过表达慢病毒的Lenti-HIF-1α组、感染阴性对照慢病毒的Lenti-negative组、只加培养基的MOCK组,给予相应干预后采用嘌呤霉素(1 μg/ml)筛选高表达HIF-1α细胞株,观察病毒感染效率,采用蛋白免疫印迹法分析HIF-1α蛋白表达情况.结果 测序鉴定结果提示成功合成三突变型HIF-1α重组质粒.荧光显微镜下观察到HEK293T细胞中有大量增强绿色荧光蛋白(EGFP)表达.重组慢病毒感染EA. hy926细胞后,荧光显微镜下可见大量EGFP表达,Lenti-HIF-1α 组细胞稳定表达HIF-1α蛋白,且其表达水平高于Lenti-negative组及MOCK组.结论 重组三突变型HIF-1α慢病毒过表达载体可成功构建,并可获得稳定表达HIF-1α的人脐静脉内皮细胞株.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李桥川	广西医科大学第一附属医院血液内科	33	55	4.0	6.0
2	李慧	广西医科大学第一附属医院老年综合科	7	56	4.0	7.0
3	杨鹏程	广西医科大学第一附属医院血液内科	3	2	1.0	1.0
4	韦莉莉	广西医科大学第一附属医院老年综合科	5	1	1.0	1.0