猪IL-17A荧光定量PCR检测方法的建立及其在PCV2感染检测中的应用

• 作者: 朱瑞良 柳亚茹 沈志强 王金良 董林 赵晶
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 学科: 农学
• 关键词: 猪白介素17A 实时PCR 猪圆环病毒2型
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 87-91
• 页数: 5页
• 分类号: S855.3
• 字数: 3568字
• 语种: 中文

摘要

根据GenBank中猪白介素17A(interleukin-17A,IL-17A)的基因序列,设计特异性引物,构建阳性重组质粒,并以重组质粒为模板,建立定量检测猪IL-17A的荧光染料(SYBR Green Ⅰ)实时PCR (RT-PCR)检测方法.结果 显示:PCR扩增片段大小242 bp,与GenBank已知基因序列同源性100％;建立的RT-PCR检测方法在101～ 106拷贝/μL时,标准模板的Ct值与浓度之间有较好的线性关系,扩增曲线呈“S”型,R2≥0.997 7;熔解曲线分析表明,产物为特异性单峰且重复性较好;仔猪外周血中IL-17A mRNA转录定量检测发现,人工感染猪圆环病毒2型(PCV2)猪外周血中IL-17A mRNA的表达量明显升高,且在第7天达到高峰值.本研究为IL-17A基因转录的定量检测提供了技术支持,同时验证了IL-17A可作为检测PCV2感染的新型标志物.