金黄色葡萄球菌LukS-PV-GFP融合蛋白的载体构建及表达纯化

• 作者: 常文娇 戴媛媛 汪自然 马筱玲
• 来源期刊: 安徽医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 杀白细胞素 绿色荧光蛋白 原核表达
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1903-1907
• 页数: 5页
• 分类号: R394.3
• 字数: 2987字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2019.12.013

摘要

目的 构建LukS-PV与GFP融合蛋白表达载体,在大肠杆菌中表达纯化并鉴定.方法 煮沸法提取金黄色葡萄球菌铜23的DNA作为模板,PCR扩增得到LukS-PV基因产物,经胶回收后与pMD-18T质粒连接过夜后转化至感受态菌DH5α中.提取质粒经PCR、测序鉴定无误,双酶切后连接到pet28a-N6H-GFP载体上,先转化至感受态菌DH5α再转化到BL21宿主菌中.对LukS-PV-GFP表达产物使用SDS-PAGE电泳分析,并取诱导前和IPTG诱导5 h菌液涂片置于荧光显微镜下观察.使用Western blot对诱导前及纯化后蛋白进行鉴定.结果 成功构建了LukS-PV与GFP融合蛋白表达载体,诱导纯化后获得较高浓度和纯度的重组融合蛋白,且诱导前无荧光,诱导后宿主菌BL21可在荧光显微镜下显示绿色荧光.Western blot结果显示纯化后蛋白出现特异性条带.结论 成功地纯化得到了具有生物学活性的LukS-PV-GFP重组融合蛋白,为进一步研究LukS-PV的功能定位和相互作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	马筱玲	安徽医科大学附属省立医院检验科	60	443	11.0	18.0
2	戴媛媛	安徽医科大学附属省立医院检验科	15	104	5.0	10.0
3	汪自然	安徽医科大学附属省立医院检验科	5	1	1.0	1.0
4	常文娇	安徽医科大学附属省立医院检验科	11	45	4.0	6.0