猪血管紧张素转化酶2重组蛋白诱导表达和纯化条件的优化

• 作者: 张源淑 王凯 王换换 肖航
• 来源期刊: 南京农业大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: ACE2重组蛋白 包涵体 KCl染色切胶 Ni2+-NTA亲和层析
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 316-321
• 页数: 6页
• 分类号: S852.2
• 字数: 4121字
• 语种: 中文
• DOI: 10.7685/jnau.201802018

摘要

[目的]本文旨在探索猪血管紧张素转化酶2(ACE2)在大肠杆菌中最佳表达条件和纯化蛋白的最佳方法.[方法]将已构建好的猪重组表达载体pET-32a-ACE2转染至大肠杆菌BL21(DE3),通过改变IPTG诱导浓度以及诱导时间来对诱导表达条件进行筛选,实现目的蛋白高效表达后选用Ni2+-NTA亲和层析和KC1染色切胶2种方法,对获得的重组猪pET-32a-ACE2融合蛋白进行纯化,SDS-PAGE和免疫印迹等分析鉴定表达产物.[结果]当IPTG浓度为1 mmol· mL-1、诱导时间为10h时,ACE2蛋白在BL21 (DE3)中表达量最高,以包涵体形式存在.表达产物的相对分子质量约为100× 103,与预期目的蛋白大小相符.选用的Ni2+-NTA亲和层析和KCl染色切胶2种方法纯化重组pET-32a-ACE2融合蛋白包涵体,均能得到可溶性的重组蛋白,但KC1染色切胶法纯化获得的可溶性重组蛋白浓度及纯度都更佳,纯化蛋白经Western blot鉴定具有良好的抗原性.[结论]本试验建立猪pET-32a-ACE2重组蛋白诱导表达的最佳条件:IPTG浓度1 mmol·mL-1,诱导时间为10h.并且以KCl染色切胶法纯化该重组pET-32a-ACE2融合蛋白包涵体效果更好.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张源淑	南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室	99	589	13.0	18.0
2	王凯	南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室	112	2075	25.0	42.0
3	王换换	南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室	7	16	2.0	3.0
4	肖航	南京农业大学农业农村部动物生理生化重点开放实验室	5	18	2.0	4.0