申克孢子丝菌STE20基因RNA干扰菌株的构建方法

• 作者: 侯彬彬 王林会 赵林 郑方亮
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 申克孢子丝菌 STE20 RNA干扰 载体构建
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 129-133
• 页数: 5页
• 分类号: R379.9
• 字数: 3196字
• 语种: 中文

摘要

目的 构建真菌通用的RNA干扰载体,以广泛用在多种真菌基因干扰的研究中.方法 利用现有的植物双元表达载体进行改造,将pBlueScriptⅡ的多克隆位点(MCS)酶切下来构建干扰载体;为使载体适于农杆菌转化,加入T-DNA边界重复序列;为便于转化后的筛选,将潮霉素抗性基因构建到干扰载体上.改造以前的干扰载体仅适于青霉菌属的RNA干扰,为扩大干扰范围,扩增pSilent-1质粒中的真菌通用启动子Ptrpc,间隔序列和终止子Ttrpc,并引入潮霉素抗性基因,使其在间隔序列两侧加上目的基因的正反向干扰序列以构建载体.结果 利用本实验构建的载体PCB309-PSUST及优化的反应体系成功实现了对孢子丝菌STE20基因的有效干扰,操作简便、转化效率高、转化子稳定.结论 成功构建的这种载体适于根癌农杆菌介导,能够对多种丝状真菌基因进行RNA干扰研究用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯彬彬		9	9	2.0	3.0
2	郑方亮	辽宁大学生命科学院	8	24	3.0	4.0
3	赵林		6	13	1.0	3.0
4	王林会	大连理工大学生命科学院	3	8	1.0	2.0