人真核翻译起始因子3C基因的克隆及表达

• 作者: 孙潇 罗真真 董怡萍 赵谦 韩苏夏
• 来源期刊: 西部医学
• 学科: 医学
• 关键词: 真核翻译起始因子3C 人下咽鳞癌细胞 基因克隆 真核表达
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 基础医学研究
• 页码范围: 1328-1333
• 页数: 6页
• 分类号: R730.261
• 字数: 4282字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-3511.2019.09.004

摘要

目的 构建人真核翻译起始因子3C(Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3C)编码区全长的真核表达载体,转染FaDu人下咽鳞癌细胞系,为探讨EIF3C的生物学功能奠定基础.方法 从人下咽鳞癌细胞系中提取总RNA,反转录成cDNA后用特异性引物PCR扩增EIF3C基因编码区全长(NM_001037808.2),双酶切后将EIF3C基因编码区全长克隆到载体pCMV-Blank上,构建真核表达载体pCMV-EIF3C.转染FaDu细胞系,real-timePCR和Western blot检测EIF3C表达水平.将未加质粒转染FaDu细胞作为未加质粒转染组,加质粒pCMV-Blank作为pCMV-Blank转染组,以及加质粒pCMV-EIF3C作为pCMV-EIF3C转染组.分别将pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA和蛋白表达水平与未加质粒转染组、pCMV-Blank转染组进行比较,以及比较未加质粒转染组和pC-MV-Blank转染组.通过生物信息学网站和软件分析人EIF3C氨基酸序列的理化性质、磷酸化位点、二级结构和三维结构.结果 测序结果表明构建的真核表达载体pCMV-EIF3C中人EIF3C序列正确.转染实验表明载体pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA水平相比载体pCMV Blank转染组升高7.08倍,未加质粒转染组升高8.02倍(P＜0.001),且载体pCMV-EIF3C转染组蛋白表达水平相比于载体pCMV-Blank转染组和未加质粒转染组也显著升高(P＜0.05).EIF3C蛋白质由913个氨基酸组成,预测含有27个磷酸化位点,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主.结论 成功构建真核表达载体pCMV-EIF3C,并使EIF3C在下咽鳞癌细胞系中过表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	韩苏夏	西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科	55	305	11.0	15.0
2	赵谦	西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科	25	122	6.0	10.0
3	孙潇	西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科	8	30	3.0	5.0
4	董怡萍	西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科	4	7	2.0	2.0
5	罗真真	西安交通大学第一附属医院肿瘤放疗科	1	0	0.0	0.0