MiR-224-5p靶向沉默前蛋白转化酶枯草溶菌素9影响HepG2细胞脂质摄取与蓄积

• 作者: 何倩 唐惠芳 高亚
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: miR-224-5p 前蛋白转化酶枯草溶菌素9 低密度脂蛋白受体 高脂血症 动脉粥样硬化
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 401-409
• 页数: 9页
• 分类号: R363|R5
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨miR-224-5p对前蛋白转化酶枯草溶菌素9(PCSK9)表达及对HepG2细胞摄脂能力的影响.方法 运用生物信息学方法对miR-224-5p基因位置、保守性、种子序列进行分析.在Targetscan、miRanda、miRDB、RNAhybrid等多个数据库分析miR-224-5p与PCSK9结合位点及结合自由能.双荧光素酶报告基因验证miR-224-5p与PCSK9 mRNA 3'UTR直接靶向结合.Western blot检测miR-224-5p模拟物和miR-224-5p抑制剂对PCSK9和低密度脂蛋白受体(LDLR)蛋白的影响.细胞免疫荧光直接观察细胞膜上的LDLR.油红0染色和DiI-LDL分别观察miR-224-5p对HepG2细胞脂滴含量和脂质摄取能力的影响.结果 生物信息学分析发现人的miR-224-5p基因定位于Xq28,不同物种间高度保守.miR-224-5p与PCSK9 mRNA 3'UTR存在靶向结合的基础,结合自由能较低.双荧光素酶报告基因显示,miR-224-5p模拟物能抑制PCSK9-WT 3'UTR荧光素酶活性,而对PCSK9-Mut 3'UTR没有抑制作用,表明PCSK9 mRNA 3'UTR是miR-224-5p的靶点.进一步实验发现miR-224-5p模拟物能够明显抑制PCSK9蛋白表达,增加LDLR蛋白含量.miR-224-5p下调后则表现为PCSK9表达增加,细胞LDLR水平降低.此外,油红0染色可见miR-224-5p模拟物组HepG2细胞内的脂滴明显减少,而miR-224-5p抑制剂组HepG2细胞内的脂滴明显增多.miR-224-5p高表达后明显促进HepG2细胞对LDLC的摄取.结论 miR-224-5p靶向结合PC-SK9 mRNA 3'UTR,抑制PCSK9表达,进而降低HepG2细胞内脂滴含量,增加HepG2细胞对脂质的摄取.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐惠芳	南华大学附属第一医院心内科	31	81	5.0	7.0
2	何倩	南华大学附属第一医院心内科	1	0	0.0	0.0
3	高亚	岳阳市第二人民医院病理科	1	0	0.0	0.0