IBRV gD蛋白的原核表达及其间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 吕天星 吴倩 周雅坪 张建华 张新竹 王艳芳 白帆 郝永清 郭婷 陈新迪 魏鑫
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 牛传染性鼻气管炎病毒 gD蛋白 原核表达 ELISA
• 年，卷（期）: 2019,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 2129-2134
• 页数: 6页
• 分类号: S852.65
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2019.11.06

摘要

利用生物学软件分析牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV) gD蛋白的抗原决定簇,发现相应的核酸序列,设计特异性引物用PCR扩增IBRV gD基因片段并克隆到原核表达载体pET-32a中,通过双酶切鉴定正确和测序正确后进行诱导表达.利用间接ELISA方法和Western blot鉴定gD重组蛋白的免疫原性和反应原性.最后将gD重组蛋白用作包被抗原,并通过优化相应的反应条件建立检测IBRV抗体的间接ELISA方法.结果 显示,表达的gD重组蛋白具有良好的免疫原性和反应原性,间接ELISA阴阳性临界值为:D450nm值=0.23.重组抗原gD与口蹄疫、牛病毒性腹泻、赤羽病、副结核病、布鲁菌病、结核病等阳性血清无交叉反应,具有比较好的特异性.组内和组间变异系数均小于5％,重复性较好.建立的ELISA方法结果显示,当测试相同的200个临床血清样本时,与IDEXX牛传染性鼻气管炎病毒gB X3抗体检测试剂盒相比,两者符合率为96％.本试验为IBRV抗体间接ELISA检测试剂盒的开发奠定了基础.