狂犬病病毒基质蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立

• 作者: 宫苗苗 曾妮 李刚 程朝飞
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒 基质蛋白 原核表达 蛋白纯化 酶联免疫吸附试验
• 年，卷（期）: 2013,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 17-22,26
• 页数: 7页
• 分类号: R373.9
• 字数: 5449字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2013.01.003

摘要

目的 以原核表达的狂犬病病毒M蛋白作为检测抗原,建立间接ELISA方法用来检测狂犬病病毒抗体.方法 为表达狂犬病病毒(RV)基质蛋白(M),采用RT-PCR方法从狂犬病病毒Flury-LEP株中扩增RV基质蛋白基因,双酶切后定向克隆至原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET-M.将重组质粒pET-M转化至宿主菌E.coli Rosetta中进行表达.SDS-PAGE和Western blot分析确定蛋白表达量和特异性.用纯化的重组M蛋白作为包被抗原建立检测犬RV抗体的间接ELISA方法,通过优化反应条件,确定抗原最佳包被量、血清的最佳稀释度、Protein A-HRP的最佳稀释度.结果 经PCR、双酶切及测序鉴定,重组质粒pET-M构建成功,将重组质粒进行转化后诱导表达,经SDS-PAGE电泳分析得到高效表达的M蛋白,重组蛋白可被RV阳性血清特异性识别,表明基质蛋白具有良好的反应原性.用表达的狂犬病病毒M蛋白建立了检测RV抗体的间接ELISA方法,用该间接ELISA方法与以狂犬病病毒作为诊断抗原的商品化ELISA试剂盒分别对93份临床血清样品进行检测,结果两者的符合率为89.2%.结论 用原核表达的重组M蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA方法可用做检测犬RV抗体水平的参考.