狂犬病毒N基因的原核表达及间接ELISA方法的建立

• 作者: 夏咸柱 薛琳 高明华
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病毒ERA株 核蛋白基因 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2007,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 31-34
• 页数: 4页
• 分类号: R5
• 字数: 3906字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2007.01.008

摘要

目的 用表达的狂犬病核蛋白建立检测狂犬病抗体的间接ELISA方法.方法 根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)ERA株N基因序列设计引物,利用PCR的方法从重组质粒pMD-N中扩增RV N基因,将该基因片段定向克隆到原核表达载体pET28a(+)中,构建原核表达载体pET-N.阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达并确定表达N基因的最佳诱导时间.通过凝胶薄层扫描分析和Western-blot分析确定表达蛋白的表达量和特异性.用纯化的表达产物作为诊断抗原,通过对各反应条件的优化,初步建立检测RV抗体的间接ELISA方法.结果 扩增了RV N基因,构建了原核表达载体pET-N和原核表达菌,表达了N基因且目的 蛋白以包涵体形式存在表达菌中,最佳诱导时间为4 h.重组蛋白表达量占菌体总蛋白的56.8%,并能与RV阳性血清发生特异性反应.用表达的狂犬病重组N蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法.结论 成功表达了狂犬病核蛋白,用表达的狂犬病核蛋白建立的间接ELISA方法可以用于RV抗体的检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	夏咸柱	军事医学科学院军事兽医研究所	61	402	11.0	15.0
2	薛琳	吉林大学畜牧兽医学院	3	37	3.0	3.0