狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用

• 作者: 李刚 范晓娟 赵刚 陈铁桥
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒LEP-Flury株 P基因 P蛋白 原核表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2010,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 163-167
• 分类号: R373.9
• 字数: 4936字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.02.017

摘要

目的 以狂犬病病毒P蛋白作为检测抗原,用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体.方法 根据GenBank发表的狂犬病病毒(Rabies Virus,RV)LEP-Flury株的基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增出P基因的全长序列,克隆于pGM-T载体中,获得重组质粒pGM-T-P,将重组质粒用限制性内切酶NotI和EcoRI进行双酶切,酶切产物定向克隆于原核表达载体pET-32a(+)中,构建原核重组表达质粒pET-32a-P,阳性重组质粒转化原核表达宿主菌BL21(DE3),用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western-blot分析确定蛋白表达量和特异性.用纯化的蛋白作为诊断抗原,通过对反应条件的优化,初步将间接ELISA方法应用于狂犬病病毒抗体的检测中.结果 扩增RV P基因,构建了克隆质粒pGM-T-P、原核表达质粒pET-32a-P,高效表达了主要以可溶性形式存在的P蛋白,并能与RV阳性血清发生特异性反应.用表达的狂犬病病毒重组P蛋白建立了用于RV抗体检测的间接ELISA方法.结论 成功表达了磷蛋白,用其作为固化抗原以间接ELISA方法检测RV抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李刚	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	111	742	14.0	23.0
2	陈铁桥		67	385	11.0	15.0
3	范晓娟	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所	8	55	4.0	7.0
4	赵刚		10	37	4.0	6.0