狂犬病病毒G基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的初步建立与应用

• 作者: 史利军 曾妮 李刚 王净 王慧文 穆秀明 邱文英 高志花
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 狂犬病病毒 G蛋白 表达 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 279-282
• 分类号: R373.9
• 字数: 3023字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.04.003

摘要

目的 以重组G蛋白为检测抗原,应用间接ELISA方法检测狂犬病病毒抗体.方法 根据GenBank 公布的狂犬病病毒LEP-Flury株基因序列设计引物,PCR扩增出目的基因,连接pGM-T载体,重组质粒经BamH I和XhoⅠ双酶切,连接到表达载体pGEX-6P-1,构建重组表达载体pGEX-G.将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中,在IPTG诱导下表达目的蛋白,表达蛋白纯化后SDS-PAGE电泳分析并经Western blotting鉴定.纯化的G蛋白作为包被抗原,建立间接ELISA方法检测93份犬血清抗体.结果 成功构建了克隆载体pGM-G和表达载体pGEX-G,高效表达了狂犬病病毒G蛋白,融合蛋白分子量大小为79kDa,表达蛋白可与狂犬病病毒抗血清发生特异性反应.建立的检测方法灵敏度达到1∶1 600,与商品化的试剂盒相比符合率为96.8%.结论 成功表达狂犬病病毒G蛋白,表达产物可作为检测抗原用于间接ELISA方法中狂犬病病毒抗体的检测.