狂犬病病毒糖蛋白膜外区表达及中和抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 乔彩霞 吴丹 张伟 张鹤晓 柏亚铎 汪琳 蒲静 谷强 赖平安 高志强
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 糖蛋白 膜外区表达 中和抗体 ELISA
• 年，卷（期）: 2009,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1514-1520
• 页数: 7页
• 分类号: S852.659.5
• 字数: 6181字
• 语种: 中文

摘要

采用RT-PCR方法克隆了狂犬病病毒CVS株G蛋白基因编码区,进而将完整编码区和膜外区编码基因分别克隆于pET-32a,将其中含膜外区编码基因的重组质粒pET-32a-PG转化BL21(DE3),经1.0 mmol·L-1IPTG诱导,外源基因获得高效表达.通过Western-blot以及ELISA试验证明表达产物具有良好的反应原性.以纯化后的表达产物作为抗原包被酶标板,用已知中和抗体效价的OIE参考血清对该方法进行了标准化,建立了检测狂犬病病毒中和抗体的间接ELISA方法.结果表明,抗原的最佳包被量为3.74 μg,血清的最佳稀释度为1:100,待检血清阳性临界值为0.50.用此方法检测了418份血清样品,并与荧光抗体病毒中和试验(FAVN)方法进行了比较,符合率为98.61%.