基于狂犬病病毒重组蛋白的ELISA检测方法比较研究

• 作者: 史利军 宫苗苗 李刚 王勇 田康乐 程朝飞 赵占中
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 狂犬病病毒 基质蛋白M 原核表达 间接ELISA 磷蛋白P
• 年，卷（期）: 2012,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 1925-1930
• 页数: 6页
• 分类号: S855.3|S858.292
• 字数: 4540字
• 语种: 中文

摘要

原核表达狂犬病病毒的基质蛋白(M),并以此作为包被抗原建立间接ELISA检测方法,与以狂犬病病毒磷蛋白(P)作为包被抗原建立的间接ELISA方法进行比较.根据GenBank中公布的狂犬病病毒LEP Flury株M基因序列设计特异性引物并引入Sma Ⅰ和NotⅠ酶切位点,经RT-PCR扩增得到目的基因,连接pCR(R)2.1载体,构建重组质粒pCR-RV-M,重组质粒用Sma Ⅰ和NotⅠ进行双酶切,酶切产物定向克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达载体pGEX-RV-M.将重组表达载体转化E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用IPTG诱导表达目的蛋白,SDS-PAGE分析表明蛋白表达量较大,且主要以可溶性的形式表达.亲和层析纯化目的蛋白,Western blot表明融合蛋白具有良好的反应原性,使用纯化的融合蛋白作为包被抗原建立了间接ELISA方法并检测了95份血清,同时使用带有His标签的重组狂犬病病毒磷蛋白P(RV-His-P)建立的ELISA方法和商品化的ELISA试剂盒检测该血清.结果表明:与商品化的以全病毒作为包被抗原的ELISA检测试剂盒相比,使用重组P蛋白作为包被抗原建立的间接ELISA检测方法具有更高的符合率,能够代替全病毒作为诊断抗原建立检测方法.