鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因缺失株的构建及其生物学特性的研究

• 作者: 吴庭才 廖成水 张春杰 张梦珂 李银聚 毛福超 王晓利 程相朝
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 鼠伤寒沙门菌SL1344 5'-nucleotidase基因 缺失株 回复株 生物学特性
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 589-597
• 页数: 9页
• 分类号: S852.612
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0042

摘要

为了探究5’-nucleotidase基因的功能及其在鼠伤寒沙门菌感染中的作用,本研究首先构建缺失1 112 bp的5'-nucleotidase基因的重组自杀性质粒pRE112△5'-nucleotidase,利用重组自杀性质粒介导的等位基因交换技术,两步法筛选出SL1344△5'-nucleotidase缺失株,并对其生物学特性进行初步研究.PCR及测序结果表明,SL1344△5'-nucleotidase构建成功,且回复株SL1344C△5'-nucleotidase构建成功.进一步研究表明,缺失株SL1344△5'-nucleotidase保留了亲本菌株SL1344的血清型1,4,5,12∶ i∶1,2,且能够稳定遗传缺失1 112 bp的5’-nucleotidase基因,生长速度没有发生明显改变.但是,缺失株SL1344△5'-nucleotidase口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD50为4.30×107 CFU,毒力降低至亲本株SL1344的1.96％.免疫保护率试验结果显示,对6周龄BALB/c小鼠免疫后第17天,鼠伤寒沙门菌野生株攻毒有50％的保护率.缺失株免疫小鼠后第21天,血清抗体IgG水平达到最高.回复菌株与亲本亲株之间生物学特性无显著性差异,基本恢复到野生型水平.上述结果表明,SL1344△5’-nucleotidase基因缺失株构建成功,遗传稳定,毒力明显降低,且具有较好的免疫原性,为研究鼠伤寒沙门菌5’-nucleotidase基因与其致病力之间的关系提供了依据,并为研究它在鼠伤寒沙门菌感染中的作用奠定了基础.