新德里金属β-内酰胺酶-4的原核表达及酶活性研究

• 作者: 喻研 张玲莉 彭燕 沈秉正 熊远果 祝成亮
• 来源期刊: 中华生物医学工程杂志
• 关键词: 新德里金属β-内酰胺酶-4 原核表达 酶促反应动力学 酶活性
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1-6
• 页数: 6页
• 字数: 4111字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1674-1927.2019.01.001

摘要

目的 利用生物工程技术原核表达新德里金属β-内酰胺酶-4(NDM-4),测定其水解底物的酶促反应动力学参数,并研究pH值及温度对酶活性的影响.方法 利用聚合酶链式反应技术扩增临床分离的携带blaNDM-4基因,扩增后克隆至pET30a载体,构建原核表达重组质粒,转化至E.coli BL21 (DE3)中,测定工程菌对各类β-内酰胺类抗生素抗性后,利用工程菌E.coli BL21(DE3)-pET30a-NDM-4诱导表达NDM-4酶.过表达的重组酶用Ni2+柱纯化,经蛋白电泳及质谱鉴定后,测定其水解底物的酶促反应动力学参数及最适pH值和温度.结果 通过测序确定重组质粒pET30a-NDM-4序列正确,获得blaNDM-4基因的工程菌具对β-内酰胺类抗生素的抗性,过表达的重组酶相对分子质量约为28400,纯化后蛋白浓度为0.4 g/L,该酶对包括碳青霉烯类几乎所有β-内酰胺类抗生素均具有较高水解活性,其最适pH值为7.5,最适温度为35℃.结论 利用原核表达系统成功过表达并获得具有高效水解β-内酰胺环活性的NMD-4酶,为深入研究其作用机制及酶学特性提供了物质基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	祝成亮	武汉大学人民医院检验科	72	339	10.0	14.0
2	彭燕	武汉大学人民医院药学部	73	320	11.0	14.0
3	张玲莉	武汉大学人民医院药学部	68	254	8.0	12.0
4	沈秉正	武汉大学人民医院药学部	29	80	5.0	8.0
5	喻研	华中科技大学同济医学院附属同济医院消化内科	18	72	4.0	7.0
6	熊远果	武汉大学人民医院药学部	6	11	1.0	3.0