LEN-5型β-内酰胺酶基因的克隆及原核表达

• 作者: 卢月梅 张阮章 武学成 王沙燕 胡玉华 钟运华 陈升汶
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: β-内酰胺酶 原核表达 等电聚焦电泳
• 年，卷（期）: 2010,（3）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 266-268
• 页数: 3页
• 分类号: R378
• 字数: 2410字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2010.03.019

摘要

目的 对来自肺炎克雷伯菌临床菌株的LEN-5型β-内酰胺酶进行基因克隆和重组表达.方法 从相应临床菌株提取质粒DNA;以质粒为模板,PCR扩增LEN-5基因,扩增产物经Nde I、Xho I酶切后连接至pET-26b (+)表达载体,重组质粒经DNA测序确证后,转入大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达.超声破碎法提取蛋白表达产物,头孢硝噻吩检测其活性,并检测蛋白的等电点(pI).结果 PCR扩增获得879bp的产物,DNA序列显示该片断序列与目的 序列完全一致.重组表达载体经Nde I、Xho I酶切及DNA测序后表明,目的 基因已成功接入表达载体,表达产物经头孢硝噻吩检测显示具有β-内酰胺酶活性,显示载体[pET-26b(+)/LEN-5]构建成功.表达蛋白的等电点为7.6.结论 β-内酰胺酶LEN-5基因在原核细胞中完成了重组和表达,为进一步做酶动力学及酶的其他分子生物学特性研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	卢月梅	深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院	75	585	13.0	21.0
2	张阮章	深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院	37	316	10.0	16.0
3	胡玉华	深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院	16	55	4.0	6.0
4	钟运华	深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院	1	1	1.0	1.0
5	武学成	深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院	3	3	1.0	1.0
6	陈升汶	深圳市人民医院暨南大学第二临床医学院	24	168	7.0	12.0