沉默SCAP基因对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响

• 作者: 张梦璐 张菡 杨国宇 王月影 邢智洋 韩立强 高腾云
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 奶牛 奶牛乳腺上皮细胞 固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白 基因沉默 脂滴
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 507-516
• 页数: 10页
• 分类号: S823.2
• 字数: 6586字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.03.005

摘要

旨在探究沉默固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SREBP cleavage-activating protein,SCAP)对奶牛乳腺上皮细胞脂滴的影响,本研究构建了SCAP短发夹RNA慢病毒载体,包装感染奶牛乳腺上皮细胞,通过在培养基中添加嘌呤霉素筛选获得SCAP基因沉默稳转细胞株,采用Real-time PCR和Western blot观察基因沉默细胞株中SCAP基因和蛋白的表达,尼罗河红和油红O染色脂滴检测SCAP基因沉默及SCAP质粒瞬时转染对细胞脂滴形成的影响.结果表明,本研究成功构建了奶牛SCAP基因沉默慢病毒重组载体,感染细胞后经过5 mg· L-1嘌呤霉素筛选得到SCAP基因沉默稳转细胞株.基因检测发现,各个沉默细胞株的SCAP基因表达显著降低(P＜0.05或P＜0.01).与对照组相比,RNAi-SCAP3细胞中的SCAP蛋白表达降低为对照组的0.49倍(P＜0.05),脂代谢基因SCD和FAS表达也显著下降(P＜0.05).脂滴染色发现,RNAi-SCAP3沉默细胞株的脂滴含量显著低于对照组细胞(P＜0.01),脂滴直径≤2.0 μm的小脂滴个数增多,而直径≥2.5 μm的大脂滴个数减少;将SCAP真核表达载体瞬时转染RNAi-SCAP3细胞株后发现,SCAP基因的过表达显著减少了细胞中小脂滴比例而增加了大脂滴比例(P＜0.05).本研究成功构建了SCAP基因沉默稳转细胞株,发现SCAP的表达影响了细胞脂滴直径的大小.