奶牛BTN1A1基因超表达促进乳腺上皮细胞脂滴合成

• 作者: 张梦璐 杨国宇 樊晓娜 王月影 王江 褚贝贝 邢智洋 韩立强
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 嗜乳脂蛋白 乳腺上皮细胞 超表达 脂滴
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文与报告
• 页码范围: 856-863
• 页数: 8页
• 分类号: S852.2
• 字数: 4943字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2019.05.009

摘要

嗜乳脂蛋白(butyrophilin subfamily 1 member A1,BTN1A1)作为一种脂滴蛋白,与乳脂肪球的形成和分泌有关.为研究奶牛(Bos taurus) BTN1A1基因超表达对乳腺上皮细胞脂滴合成的影响,本研究PCR扩增了奶牛BTN1A1基因的CDS,构建Lenti-BTN1A1慢病毒重组载体,用包装好的病毒感染奶牛乳腺上皮细胞,通过嘌呤霉素筛选获得超表达BTN1A1的乳腺上皮细胞株,提取细胞DNA,对超表达细胞株进行基因型鉴定,采用qRT-PCR和Western blot分析细胞株中BTN1A1基因和蛋白的表达;用尼罗红对细胞脂滴进行荧光标记,分析BTN1A1超表达对细胞脂滴的影响,构建BTN1A 1-pEGFP-N1载体,观察BTN1A1蛋白与脂滴的共定位.结果 显示,克隆的BTN1A1基因CDS区序列大约1 580 bp,成功构建重组的BTN1A1曼病毒载体,用5 μg/mL嘌呤霉素筛选得到BTN1A1超表达细胞株,基因型鉴定表明细胞株基因组中成功插入BTN1A1基因;与对照组细胞相比,超表达细胞株的BTN1A1基因mRNA表达增加489倍(P＜0.001),蛋白表达也明显增强;检测脂滴的荧光值发现,随着细胞培养时间的延长,BTN1A1超表达显著增加了细胞脂滴含量(P＜0.01),共定位发现BTN1A1蛋白主要分布于细胞脂滴上.结果 表明,超表达BTN1A1促进乳腺上皮细胞的脂滴合成.本研究为阐明奶牛乳腺上皮细胞的脂滴合成机制提供了基础数据.