小鼠卵巢组织定量PCR分析中内参基因的筛选

• 作者: 李键 杨显英 熊显荣 王艳 阿果约达 韩杰 黄向月
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 小鼠 卵巢 qRT-PCR 内参基因 表达稳定性
• 年，卷（期）: 2019,（2）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 446-453
• 页数: 8页
• 分类号: S814
• 字数: 3811字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2019.02.024

摘要

旨在选择小鼠卵巢组织中合适的内参基因,为研究卵巢发育过程中基因表达提供可靠数据.以不同年龄(0日龄、3周龄、5周龄、8周龄)小鼠卵巢组织为试验材料,Trizol法提取样本总RNA,并合成cDNA,根据已报道的小鼠(Mus musculus)各组织中相对稳定表达的8个常见内参基因(Gapdh、β-actin、β-tubulin、18S rRNA、16S rRNA、H2afz、Ubc、Rpl13a)的GenBank登录序列设计引物,采用实时荧光定量PCR (qRT-PCR)方法构建卵巢cDNA等梯度(1∶10)稀释后的标准曲线;利用geNorm分析候选内参基因的表达稳定性(M);NormFinder筛选表达最稳定的内参基因;BestKeeper计算qRT-PCR结果的标准差(SD)和变异系数(CV),从而预测候选内参基因的稳定性.结果表明,8个内参基因的引物特异性较强,具有良好的线性关系;候选内参基因的表达稳定度排序:Gapdh=β-actin＞18S rRNA＞Ubc＞16S rRNA＞H2a fz＞Rpl13a＞β-tubulin;其中Gapdh表达稳定性最好,且标准差及方差系数最小(SD:0.32,CV:1.95),H2afz标准差及方差系数最大(SD＞1.0,CV:5.76).综上表明,本研究成功获得出生后小鼠卵巢发育过程中稳定表达的内参基因(Gapdh和β-actin),可作为其基因表达研究中的最佳候选内参.