非洲猪瘟病毒免提取核酸荧光定量PCR检测方法的建立

• 作者: 刘建利 史卫军 张彩虹 曹琛福 杨俊兴 林彦星 花群义
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 非洲猪瘟病毒 免提取核酸 荧光定量PCR
• 年，卷（期）: 2019,（10）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1216-1221
• 页数: 6页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0174

摘要

根据非洲猪瘟病毒(ASFV)保守的VP72基因序列,设计特异性引物和探针,经过优化反应体系中各组分及反应条件,建立了直接检测样品中ASFV的荧光定量PCR方法,并分析该方法的特异性和敏感性.结果 显示,该直扩荧光定量PCR方法只对ASFV有特异性扩增,对其他几种相似疾病病原的灭活抗原,如猪瘟病毒、猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪圆环病毒、口蹄疫病毒、印第安纳型水泡性口炎病毒、新泽西型水泡性口炎病毒、猪流行性腹泻病毒等检测均呈阴性.敏感性试验结果显示,对10倍梯度稀释的非洲猪瘟病毒灭活抗原的检测敏感性可达1×10-6,与OIE推荐的传统的荧光PCR的检测敏感性相当.3个ASFV稀释度样品的组内和组间重复的变异系数均小于5％.该方法无须提取核酸,可在60 min内完成对样品的检测,检测快速、灵敏,结果准确,结合便携式荧光PCR仪,为野外或现场的非洲猪瘟病毒快速检测提供了一种切实可行的方法.