海洋球石藻病毒甾醇去饱和酶基因的克隆与表达

• 作者: 刘静雯 王彩凤
• 来源期刊: 集美大学学报（自然科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 海洋球石藻病毒 甾醇去饱和酶基因 酿酒酵母 克隆 表达 脂类 薄层色谱
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 水产、食品与生物技术
• 页码范围: 335-342
• 页数: 8页
• 分类号: Q786
• 字数: 4963字
• 语种: 中文
• DOI: 10.19715/j.jmuzr.2019.05.03

摘要

以海洋球石藻(Emiliania huxleyi)病毒EhV-99B1基因组为模板,用一对病毒甾醇去饱和酶(sterol desaturase,SD)基因的特异性引物进行PCR扩增,获得EhV-SD基因,将扩增产物克隆至pMD19-T载体后进行测序,并对该基因编码的蛋白质序列进行生物信息学分析.将测序正确的目的基因亚克隆入酿酒酵母表达载体pYES2/CT中,转化酿酒酵母缺陷型菌株YMR015C,并用D-半乳糖诱导表达,提取重组酵母和野生型酵母细胞总脂并进行薄层色谱(thin layer chromatography,TLC)分析.结果显示:EhV-SD基因全长为987 bp,编码328个氨基酸,该蛋白质的理论等电点为8.31,预测的蛋白质分子质量为37.83 ku,为疏水性、 不稳定蛋白质,存在6个跨膜结构域,不存在信号肽;其二级结构中,α-螺旋含量最多.氨基酸序列比对结果显示,EhV-SD基因与宿主球石藻及金色藻属(Chrysochromulina sp.CCMP 291)亲缘关系较近.TLC结果表明,EhV-SD基因的表达导致酵母细胞极性较强的脂类明显减少,而极性较弱的脂质成分显著增加,表明EhV-SD具有一定的催化活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘静雯	集美大学食品与生物工程学院	23	156	7.0	11.0
3	王彩凤	集美大学食品与生物工程学院	1	0	0.0	0.0