白念珠菌磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶蛋白Ppt2的制备

• 作者: 刘锦燕 孟玲宁 王珏婷 赵悦 项明洁
• 来源期刊: 中国真菌学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白念珠菌 磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶Ppt2 蛋白制备纯化
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 分类号: R379.4
• 字数: 3631字
• 语种: 中文

摘要

目的 制备白念珠菌磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶蛋白Ppt2,用于后期荧光偏振法筛选靶点为Ppt2酶的临床药物.方法 以白念珠菌BWP17基因组DNA为模板,用PCR法扩增PPT2 DNA序列,与线性化载体pET43.1a(+)通过同源重组连接,成功构建重组表达质粒pET43.1a(+)/PPT2后转化入大肠埃希菌感受态细胞BL21 (DE3),通过IPTG诱导重组蛋白表达,利用超声破碎法抽提蛋白Ppt2后离心收集上清和沉淀,通过SDS-PAGE验证蛋白的可溶性.利用镍柱对蛋白进行纯化,对洗脱馏分透析富集目的蛋白.最后通过Bradford方法测得蛋白含量.结果 在大肠埃希菌BL21中获得了白念珠菌蛋白Ppt2的高效表达;抽提蛋白后SDS-PAGE电泳结果显示Ppt2同时存在可溶性形式和包涵体形式,放大摇菌量后收集上清可溶性蛋白经镍柱纯化得到目的蛋白,再次透析富集蛋白Ppt2后利用Bradford方法测得蛋白Ppt2浓度为0.4 mg/mL.结论 成功制备了白念珠菌的磷酸泛酰巯基乙胺基转移酶蛋白Ppt2,为后期利用荧光偏振法筛选靶点为Ppt2酶的临床药物提供基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘锦燕	上海交通大学医学院附属瑞金医院卢湾分院放免检验科	37	96	6.0	8.0
2	孟玲宁	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科	8	6	1.0	2.0
6	赵悦	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科	12	23	3.0	4.0
10	王珏婷	上海交通大学医学院附属瑞金医院检验科	1	0	0.0	0.0