小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 付瑞 岳秉飞 李威 李晓波 王吉 王淑菁 王莎莎 秦骁 贺争鸣 黄宗文
• 来源期刊: 实验动物科学
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠巨细胞病毒 荧光定量PCR 实验小鼠
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: R-3
• 字数: 3337字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1006-6179.2019.06.007

摘要

目的 建立小鼠巨细胞病毒(Mouse Cytomegalovirus,MCMV)荧光定量PCR方法并对其进行初步应用.方法 选取NCBI发表的MCMV Smith株DNA polymerase基因保守序列设计引物探针,建立MCMV的荧光定量PCR方法,对方法的特异性、敏感性、重复性及稳定性进行验证,并应用该方法检测掺入MCMV的小鼠血液样品及2018年度送检的409份小鼠血液样本.结果 建立的MCMV荧光定量PCR方法标准曲线Slope为-3.418,R2值为0.999,扩增效率为96.137％,可定量检测到的MCMV最低含量为47 copies/μL.以大鼠巨细胞病毒,猴巨细胞病毒,人单纯疱疹病毒,伪狂犬病毒及猫疱疹病毒Ⅰ型为模板均无扩增曲线,特异性良好.方法 组内和组间变异系数分别为0.39％～0.68％和0.48％～ 1.01％,重复性和稳定性好.可检测到掺入小鼠血液样品中MCMV病毒的最大稀释度为1∶1000(100.75 TCID50/0.1 mL),409份小鼠血液样品经检测均为阴性.结论 建立的小鼠巨细胞病毒荧光定量PCR方法有很好的敏感性、特异性及稳定性,可有效地检测小鼠中MCMV,为实验小鼠MCMV的监测及相关标准的补充完善提供了技术参考.