猪巨细胞病毒TaqMan荧光定量PCR检测的建立

• 作者: 刘梅芬 刘淑敏 吴志明 拜廷阳 赵德明 赵明军 闫若潜
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 猪巨细胞病毒 实时荧光定量PCR TaqMan荧光探针 检测 应用
• 年，卷（期）: 2014,（2）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 169-174
• 页数: 6页
• 分类号: R373
• 字数: 4629字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2014.02.013

摘要

目的 建立一种特异、灵敏、快速检测猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR方法.方法 根据GenBank已登录的猪巨细胞病毒(Porcine Cytomegalovirus,PCMV)DNA序列设计合成特异性引物对和TaqMan荧光探针,经优化反应条件,建立了猪巨细胞病毒的TaqMan荧光定量PCR检测方法(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR),进行了FQ-PCR检测方法的敏感性、特异性和重复性试验;对疑似PCMV 感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对;对FQ-PCR检测结果为PCMV 阳性猪的不同内脏器官进行病毒含量比较检测.结果 成功建立了PCMV 的FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数为0.998;检测灵敏度可达1 拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/PCMV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对6个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/PCMV重组质粒分别重复扩增6次,重复结果良好;对15份临床疑似PCMV感染的组织病料进行应用检测表明,其中有9份样品为阳性,与常规PCR方法检测的阳性符合率为100%.猪的内脏器管中PCMV含量最高为扁桃体,最低的为小肠.结论 成功建立了PCMV FQ-PCR方法,可用于临床上PCMV感染猪的确诊和隐性感染猪的早期检测,对PCMV的快速诊断、综合防控及净化等具有重要意义.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵德明	中国农业大学动物医学院	372	1803	20.0	27.0
2	吴志明		61	371	11.0	15.0
3	闫若潜		94	467	12.0	17.0
4	赵明军		35	197	10.0	13.0
5	刘淑敏	郑州市中心医院消毒供应中心	6	41	4.0	6.0
6	刘梅芬		13	85	5.0	9.0