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大肠杆菌二核苷酸环化酶催化c-di-GMP生物合成
大肠杆菌二核苷酸环化酶催化c-di-GMP生物合成
作者:
孔江南
庞博文
张维
杨国宇
杨雪宸
贾宾
郑悦亭
郭豫杰
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
大肠杆菌DncV
c-di-GMP生物合成
重组表达
UPLC
酶促反应
摘要:
环二鸟苷酸(bis-(3’-5’)-cyclic dimeric guanosine monophosphate,c-di-GMP)是广泛存在于细菌中的第二信使分子,可通过STING (stimulator of interferon genes)信号通路参与先天免疫应答,是一种潜在的疫苗佐剂.为明确其先天免疫调节机制和评估免疫佐剂效果,c-di-GMP的高效合成急需解决.为建立一种相对简单、高效的c-di-GMP生物合成方法,实现体外制各c-di-GMP,本研究构建大肠杆菌(Escherichia coli)二核苷酸环化酶(dinucleotide cyclase V,DncV)重组表达载体,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropy-β-D-thiogalactoside,IPTG)诱导表达和His亲和纯化获得目的蛋白DncV;利用超高效液相色谱(ultra performance liquid chromatography,UPLC)检测DncV重组蛋白体外催化GTP生成c-di-GMP的反应.研究结果表明,IPTG诱导型表达载体pET-28a-His-DncV构建成功,亲和纯化获得的DncV重组蛋白纯度达到92%;该重组蛋白能够通过酶促反应一步生成c-di-GMP;金属离子对该酶活性影响显著,其中3种金属离子(Mg2+,Mn2+,Co2+)可提高催化效率,另外7种金属离子(Cu2+,Zn2+,Ni2+,Mo2+,Bo2+,Fe2+,Ca2+)抑制酶促反应.本研究建立了E.coli DncV重组蛋白催化合成c-di-GMP的方法体系,为c-di-GMP的大规模制备和功能研究提供了基础资料.
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核定位相关区域
激光共聚焦
内容分析
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相关文献总数
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文献信息
篇名
大肠杆菌二核苷酸环化酶催化c-di-GMP生物合成
来源期刊
农业生物技术学报
学科
农学
关键词
大肠杆菌DncV
c-di-GMP生物合成
重组表达
UPLC
酶促反应
年,卷(期)
2019,(7)
所属期刊栏目
研究论文与报告
研究方向
页码范围
1275-1281
页数
7页
分类号
S851.3
字数
5861字
语种
中文
DOI
10.3969/j.issn.1674-7968.2019.07.015
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
H指数
G指数
1
杨国宇
河南农业大学牧医工程学院
174
1205
16.0
28.0
2
郭豫杰
河南农业大学牧医工程学院
55
124
5.0
8.0
3
孔江南
河南农业大学牧医工程学院
7
3
1.0
1.0
4
郑悦亭
河南农业大学牧医工程学院
2
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5
贾宾
河南农业大学牧医工程学院
1
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6
张维
河南农业大学牧医工程学院
1
0
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杨雪宸
河南农业大学牧医工程学院
1
0
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8
庞博文
河南农业大学牧医工程学院
1
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传播情况
被引次数趋势
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引文网络
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参考文献
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节点文献
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同被引文献
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研究主题发展历程
节点文献
大肠杆菌DncV
c-di-GMP生物合成
重组表达
UPLC
酶促反应
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
农业生物技术学报
主办单位:
中国农业大学
中国农业生物技术学会
出版周期:
月刊
ISSN:
1674-7968
CN:
11-3342/S
开本:
大16开
出版地:
北京海淀区圆明园西路2号中国农业大学生命科学楼1053室
邮发代号:
2-367
创刊时间:
1993
语种:
chi
出版文献量(篇)
4211
总下载数(次)
8
总被引数(次)
40364
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农业生物技术学报2019年第2期
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