基于RNA适配体检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP

• 作者: 孔江南 张超 朱彦策 钟凯 陈慧心
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: RNA适配体 c-di-GMP cGAMP 荧光检测
• 年，卷（期）: 2018,（10）
• 所属期刊栏目: 遗传育种
• 页码范围: 2145-2153
• 页数: 9页
• 分类号: S811.3
• 字数: 5739字
• 语种: 中文
• DOI: 10.11843/j.issn.0366-6964.2018.10.010

摘要

旨在建立简单、快速的检测体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP的方法.本研究以含有T7启动子、VC2GEMM-1核糖开关序列或其突变序列VC2/g20a、spinach2和tRNA序列的双链DNA为模板,利用T7 RNA聚合酶体外转录体系制备VC2、VC2/g20a RNA适配体.通过检测绿色荧光强度分析RNA适配体对c-di-GMP和cGAMP的结合能力.结果表明,转录得到的RNA经过加热变性、缓慢退火后得到VC2 RNA适配体和VC2/g20aRNA适配体,在125 mmol· L-1 KCl和30 mmol· L-1 MgCl2溶液中孵育180 min的优化结合条件下,VC2适配体与c-di-GMP特异性结合,VC2/g20a适配体与cGAMP特异性结合;c-di-GMP对VC2适配体的半数效应浓度(EC50)为(89±1.7) nmol·L-1,cGAMP对VC2/g20a适配体的半数效应浓度为(309±4.5) nmol· L-1;VC2和VC2/g20a能够分别检测低至5 nmol·L-1和20 nmol·L-1的c-di-GMP和cGAMP;并且发现转录的RNA混合物在未纯化的情况下同样能够检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP.这种方法可以简单快速的检测VC0179体外酶促合成的c-di-GMP和cGAMP,并且为研究其他c-di-GMP和cGAMP合成酶活性提供潜在可能.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟凯	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	36	105	6.0	9.0
2	孔江南	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	7	3	1.0	1.0
3	朱彦策	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	2	0	0.0	0.0
4	张超	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	8	5	2.0	2.0
5	陈慧心	河南农业大学农业部动物生化与营养重点开放实验室	1	0	0.0	0.0