双峰驼IgA基因的原核表达及抗体制备

• 作者: 何晚红 吴秀萍 张亮 张旺东 朱曼玲 李建飞 李敏 王雯慧 陆佳
• 来源期刊: 动物医学进展
• 学科: 农学
• 关键词: 双峰驼 IgA 原核表达 抗体制备
• 年，卷（期）: 2019,（12）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 30-34
• 页数: 5页
• 分类号: S852.4
• 字数: 3808字
• 语种: 中文

摘要

为制备抗双峰驼IgA的抗体,将双峰驼IgA重链恒定区基因克隆至pET-28a(+)上,构建重组蛋白质粒pET-28a-IgA-H,再进行IPTG诱导表达、分析和纯化,以及SDS-PAGE和Western blot验证.用以获得的目的蛋白制备兔抗双峰驼IgA多克隆抗体,并通过ELISA和Western blot检测效价及其特异性.结果表明,获得的重组目的蛋白大小约为39 ku,最佳诱导表达条件为IPTG 23.83μg/mL、诱导时间6 h,且重组蛋白主要以包涵体的形式表达.ELISA检测显示抗体效价达1:32000,Western blot鉴定抗体能特异性识别原核表达的pET-28a-IgA-H蛋白,并能有效地将双峰驼IgA与IgG区别开来,表明成功获得了双峰驼IgA重链恒定区的重组蛋白及特异性良好的多克隆抗体.