金葡菌多重耐药基因norA的原核表达及其抗体制备

• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 金葡菌 norA基因 原核表达 抗体
• 年，卷（期）: 2005,（10）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 604-607
• 页数: 4页
• 分类号: R378.1+1
• 语种: 中文

摘要

按金葡菌多重耐药转运蛋白NorA的编码序列设计引物,以金葡菌基因组DNA为模板,扩增出基因norA中约1155bp的cDNA片段,将所得片段与pMD18-T载体连接,转化到感受态大肠埃希菌JM109中,成功地筛选到阳性克隆,其质粒测序结果与文献报道一致.从阳性克隆中提取质粒,经Nde I和Xho I酶切,回收1155bp的目的片段,定向克隆到pET-28a(+)表达载体中,转化至感受态大肠埃希菌DH5α中,提取质粒,再次转化到BL21(DE3)中,成功筛选到阳性克隆.经IPTG诱导阳性菌,通过SDS-PAGE检测出norA部分基因的表达.利用得到的纯化蛋白免疫家兔,并通过间接ELISA法检测抗体效价,证明得到相应抗体.