骨形态发生蛋白9基因敲除小鼠的构建

• 作者: 刘佩娟 周珂 师长宏 张海 王华 辛智倩 马翠
• 来源期刊: 中国实验动物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: CRISPR/Cas9 BMP9 基因敲除小鼠
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 311-315
• 页数: 5页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3165字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-4847.2019.03.007

摘要

目的 运用CRISR/Cas9技术敲除小鼠基因组中Bmp9基因片段,构建Bmp9基因敲除小鼠.方法根据Bmp9基因的外显子序列,设计一段sgRNA并合成.sgRNA体外转录后和Cas9 mRNA混合后显微注射受精卵细胞,注射后的受精卵细胞移植至受体动物获得子代小鼠.提取子代小鼠基因组DNA测序鉴定其基因型.基因型鉴定正确的小鼠与野生型交配后筛选纯合子小鼠.同时取纯合子小鼠心脏、肝、脾、肺、肾,匀浆后提取总RNA和总蛋白,通过qPCR、WB和免疫组化检测BMP9在各组织中的表达.结果设计并合成20 bp的sgRNA并进行体外转录,显微注射并回植后得到基因突变小鼠,连续交配后得F2代纯合子.测序结果显示,突变小鼠存在两种基因型,一种为5 bp缺失突变,另一种为13 bp缺失并伴有1 bp插入突变.与野生型C57BL/6相比,qPCR、WB和免疫组化结果均表明基因敲除小鼠肝中BMP9表达显著降低.结论利用CRISPR/Cas9技术成功构建出了BMP9基因敲除小鼠.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王华	安徽医科大学药学院	103	1055	17.0	30.0
2	周珂	空军军医大学实验动物中心	3	4	1.0	2.0
4	师长宏	空军军医大学实验动物中心	10	4	1.0	2.0
5	马翠	空军军医大学实验动物中心	2	0	0.0	0.0
9	辛智倩	空军军医大学实验动物中心	1	0	0.0	0.0
10	刘佩娟	空军军医大学实验动物中心	1	0	0.0	0.0
13	张海	空军军医大学实验动物中心	1	0	0.0	0.0