人源瞬时受体电位M2型通道Nudix水解酶9同源结构域的提取和纯化

• 作者: 余夏飞 叶培武 杨巍 马骋
• 来源期刊: 浙江大学学报（医学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 瞬时受体电位通道 焦磷酸酶类/药理学 重组融合蛋白质类/分离和提纯 谷胱甘肽转移酶
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 蛋白质的结构与功能
• 页码范围: 5-11
• 页数: 7页
• 分类号: Q71
• 字数: 5895字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3785/j.issn.1008-9292.2019.02.02

摘要

目的:摸索人源瞬时受体电位M2型通道(TRPM2)羧基端Nudix水解酶9(NUDT9)同源结构域(NUDT9-H)的蛋白提取和纯化方法.方法:异丙基硫代半乳糖苷诱导表达的Rosetta(DE3)大肠埃希菌菌株经超声破碎和离心后,将收集到的上清液与GST磁珠结合并用还原型谷胱甘肽洗脱以抽提GST-NUDT9-H融合蛋白,浓缩离心后再经分子排阻色谱层析纯化,最后经凝血酶酶切并与GST磁珠结合即得NUDT9-H蛋白.结果:含有0.5％的十二烷基-β-D-麦芽糖苷(DDM)裂解溶液体系和0.025％的DDM分子排阻层析色谱溶液体系能够提高GST-NUDT9-H融合蛋白的稳定性,再按每2 mg融合蛋白加入1U凝血酶切割24 h,即获得高纯度NUDT9-H蛋白.结论:NUDT9-H蛋白稳定性较差,提取和纯化体系中需添加DDM以稳定其构象从而提高目的蛋白的产量和纯度.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨巍	浙江大学医学院生物物理系	14	38	4.0	6.0
2	叶培武	浙江大学医学院生物物理系	1	0	0.0	0.0
3	余夏飞	浙江大学医学院生物物理系	1	0	0.0	0.0
4	马骋	浙江大学医学院	2	0	0.0	0.0