利用桥梁载体策略构建水稻条斑病菌T3SS基因诱导表达检测体系

• 作者: 吾尼尔别克·美丽 张翠萍 李生樟 李逸朗 杨小菲 杨瑞环 邹丽芳 陈功友 陈晓斌
• 来源期刊: 植物病理学报
• 学科: 农学
• 关键词: 水稻条斑病菌 T3SS基因 启动子探针载体 蛋白表达载体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 实验方法
• 页码范围: 846-856
• 页数: 11页
• 分类号: S435.111.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.13926/j.cnki.apps.000390

摘要

水稻条斑病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzicola,Xoc)侵染水稻,引起细菌性条斑病(bacterial leaf streak,BLS).Xoc主要依靠hrp基因簇(T3SS基因)编码的Ⅲ型分泌系统(type Ⅲ secretion system,T3SS)将效应蛋白注入水稻细胞中,激发寄主水稻的感(抗)病性.为了准确在Xoc中进行T3SS基因表达调控的分析,本研究设计出桥梁载体策略,将目标基因的启动子或者功能片段构建在高拷贝的桥梁载体,获得融合表达元件,通过亚克隆的方式将融合元件转入骨架载体上,获得用于转录表达和蛋白表达分析的载体.为了验证该策略的可行性,选取hrpG、hrpX和hrcC基因构建了相应的启动子探针载体和蛋白表达载体,将这些载体导入毒性调控子基因trh、lrpX和zur的突变体中,GUS活性测定、荧光定量PCR以及蛋白免疫杂交结果显示:在trh、lrpX和zur的突变体中,hrpG、hrpX和hrcC的转录表达水平、mRNA水平和蛋白表达水平呈现一致.这表明这套桥梁载体策略能够有效应用于T3SS基因转录表达和蛋白表达的分析.综上所述,运用桥梁载体能够克服低拷贝载体DNA遗传操作效率低的缺陷,这一策略也适用于毒性相关基因调控机理的研究,这将为Xoc-水稻互作研究提供高效的工作系统.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈晓斌		17	419	9.0	17.0
2	邹丽芳		44	224	8.0	12.0
3	陈功友		22	71	5.0	7.0
4	张翠萍		3	0	0.0	0.0
5	李逸朗		3	0	0.0	0.0
6	杨瑞环		3	0	0.0	0.0
7	李生樟		3	0	0.0	0.0
8	吾尼尔别克·美丽		1	0	0.0	0.0
9	杨小菲		1	0	0.0	0.0