人5型腺病毒结合抗体检测方法的建立和应用

• 作者: 侯利华 吴诗坡 宋小红 王步森 王玉东 赵拯浩 陈旖
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 医学
• 关键词: 人5型腺病毒 六邻体蛋白 酶联免疫吸附实验 结合抗体
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 636-642
• 页数: 7页
• 分类号: R392.1
• 字数: 4667字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2019.05.009

摘要

目的:建立人5型腺病毒(HAdv5)结合抗体检测方法,用于检测动物实验中血清的抗HAdv5结合抗体水平.方法:将复制缺陷型HAdv5感染293F细胞,大量表达HAdv5抗原蛋白,经Source 30Q和Sepharose 4FF两步柱层析,获得高纯度的HAdv5抗原蛋白,分别采用SDS-PAGE、HPLC和Western印迹对纯化的抗原进行鉴定,并与市售的HAdv5-Hexon进行对比分析.用纯化的HAdv5抗原蛋白建立HAdv5结合抗体检测方法,分别对包被液、抗原包被量和二抗工作浓度等检测条件进行摸索,对该方法的特异性和稳定性进行验证,并检验该方法检测结果与相应HAdv5中和抗体的相关性.最后将该检测方法应用于HAdv5载体疫苗免疫小鼠血清的HAdv5载体结合抗体水平检测.结果:获得纯度大于95％的HAdv5抗原蛋白,与市售HAdv5-Hexon相对分子质量大小一致,经HPLC和Western印迹鉴定其为HAdv5-Hexon蛋白.用纯化的HAdv5-Hexon作为抗原建立了HAdv5结合抗体检测ELISA法,确定抗原包被浓度为2μg/mL.该检测方法与其他亚型腺病毒如HAdv4、HAdv7具有一定的交叉反应,但对于无关病毒具有良好的特异性;同时该检测方法具有良好的稳定性,板内重复变异系数小于10％,板间和日间重复变异系数小于15％.该检测方法对HAdv5载体疫苗免疫小鼠血清的检测结果与HAdv5中和抗体检测结果具有良好的相关性.应用于HAdv5载体疫苗免疫小鼠血清的HAdv5结合抗体水平检测,充分显示了该法的快速、简便及高灵敏度和准确度的优势.结论:建立了稳定可靠的HAdv5结合抗体检测方法,可用于SPF级动物模型HAdv5载体结合抗体检测.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	吴诗坡	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	4	1	1.0	1.0
2	赵拯浩	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0
3	王步森	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0
4	王玉东	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	3	1	1.0	1.0
5	宋小红	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0
6	陈旖	军事科学院军事医学研究院生物工程研究所	1	0	0.0	0.0