犬瘟热病毒RT-LAMP-LFD检测方法的建立与应用

• 作者: 万忠海 何洪彬 孟轲音 张珊珊 李吉平 李忠义 李晓娜 李楠 李筱鑫 王承宇 田多 穆玉堂 郝镯
• 来源期刊: 黑龙江畜牧兽医（上半月）
• 学科: 农学
• 关键词: 犬瘟热病毒 横向流动试纸条技术 N基因 环介导等温扩增技术 敏感性 特异性
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 试验研究
• 页码范围: 1-6,180
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65+5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13881/j.cnki.hljxmsy.2018.12.0431

摘要

为了建立一种新型、稳定、可普遍应用的诊断犬瘟热病毒(Canine distemper virus,CDV)的方法,试验采用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)-横向流动试纸条(lateral flow dipstick,LFD)相结合的方法,根据CDV N基因序列中同源性相对较高的保守区设计一套标有生物素(biotin)的特异性引物,结合异硫氰酸(FITC)荧光素标记的扩增产物,建立RT-LAMP-LFD检测方法,对该方法的反应条件和反应体系进行优化,同时分析敏感性及特异性,最后检测临床应用情况.结果 表明:试验成功构建CDV RT-LAMP-LFD方法,此方法的最佳反应条件为60℃反应60 min;最佳的反应体系为镁离子浓度12 mmol/L,甜菜碱浓度0.2 mmoL/L,Bst DNA聚合酶活性8U,AMV酶活性5U,外引物与环引物比例1∶2;最低检测下限为1×102个拷贝/mL,能够特异地检测出CDV的存在,犬细小病毒(CPV)等其他病毒均为阴性,可以检测出病犬口鼻腔黏液中的CDV.说明试验建立的CDV RT-LAMP-LFD检测方法特异性强,敏感性高,操作简单,可广泛应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李楠		13	43	4.0	5.0
2	李晓娜		2	2	1.0	1.0
3	何洪彬		5	5	2.0	2.0
4	郝镯		1	0	0.0	0.0
5	张珊珊		2	0	0.0	0.0
6	李吉平		1	0	0.0	0.0
7	孟轲音		1	0	0.0	0.0
8	李筱鑫		1	0	0.0	0.0
9	万忠海		1	0	0.0	0.0
10	穆玉堂		1	0	0.0	0.0
11	李忠义		1	0	0.0	0.0
12	田多		1	0	0.0	0.0
13	王承宇		1	0	0.0	0.0