一种基于重组截短Gcaa407～614蛋白的赤羽病病毒抗体间接ELISA方法的建立

• 作者: 张俊哲 王建华 王玉玲 肖妍 赵丹 陈本龙
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 赤羽病病毒 截短Gcaa407～614蛋白 原核表达 间接ELISA 抗体检测
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 85-92
• 页数: 8页
• 分类号: S851.34
• 字数: 5214字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2019.05.016

摘要

为建立一种检测赤羽病病毒(Akabane virus,AKAV)抗体的ELISA方法,对Gc蛋白从407位至614位氨基酸的编码序列,经密码子优化后进行基因合成,然后克隆至重组表达载体PET-32a(+),转化大肠杆菌BL21 (DE3)感受态细胞,用1mmol/L IPTG在37℃进行诱导表达.用Ni+2-NTA树脂亲和层析方法纯化重组蛋白(trGcaa407～614),以Western blotting检测其抗原性用纯化trGcaa407614建立间接ELISA方法(trGcaa407～614-ELISA),并评价该方法的特异性、敏感性和重复性.结果 显示:重组蛋白trGcaa407～614以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达,经Ni+2-NTA树脂亲和层析纯化后的浓度2.4 mg/mL,纯度为94％,对山羊抗AKAV阳性血清呈现较好的抗原反应性;所建立的trGcu407～614-ELISA方法的最佳抗原包被浓度为4.0μg/mL,血清稀释度为1∶80,血清阴阳性的OD450临界值为0.318;该方法对AKAV阳性血清呈特异性反应,组内试验和组间试验的变异系数均小于10％.用该方法对273份进口牛血清进行AKAV抗体检测,发现10份血清为阳性.总之,本研究建立的trGcaa407～614-ELISA方法为血清样品中赤羽病病毒抗体的检测提供了有效手段.