MiniSOG蛋白的单克隆抗体制备及初步研究

• 作者: 杨雪花 武月章 石琦 肖康 董小平 陈冬冬 高利萍
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 单线态氧产生者(miniSOG) 光电镜关联(CLEM) 单克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 人类病毒研究论著
• 页码范围: 880-887
• 页数: 8页
• 分类号: R373.9|R511
• 语种: 中文
• DOI: 10.13242/j.cnki.bingduxuebao.003606

摘要

单线态氧产生者(mini singlet oxygen generator,miniSOG)是改造于拟南芥向光素2蛋白而获得的小分子荧光黄素蛋白,由106个氨基酸残基组成.miniSOG被广泛用于电镜及荧光显微镜,并被广泛用于发色团辅助的光灭活(Chromophore-assisted light inactivation,CALI)蛋白、DNA或RNA,并结合免疫光敏用于癌症的治疗,以及结合细胞消融用于神经科学、免疫生物学等.但是目前国内并无商品化的miniSOG抗体,为了辅助课题研究,制备抗miniSOG蛋白的单克隆抗体,本研究根据miniSOG基因的ORF区序列构建miniSOG-GST重组蛋白的原核表达载体PGEX-4T-1-miniSOG,然后将该重组质粒转化于BL21感受态大肠杆菌中,异丙基硫代半乳糖苷(Isopropyl β-D-Thiogalactoside,IPTG)诱导融合蛋白的表达,并经亲和层析方法进行纯化.将纯化后的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,利用杂交瘤技术制备单克隆抗体.筛选获得稳定分泌抗miniSOG的单克隆抗体细胞株,最终选取性能最优的4F9细胞株进行小鼠腹水制备并纯化.单抗4F9亚型为IgG1/Kappa,腹水滴度达到1∶200000,纯化抗体灵敏度达到5 ng/mL.并通过Western Blot、免疫荧光及免疫组化方法进行特异性鉴定,该单克隆抗体能特异性识别转染细胞和转基因小鼠脑组织中的miniSOG蛋白.本研究在国内首次制备了miniSOG单克隆抗体,将丰富其在其它方面的应用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	董小平		52	111	6.0	8.0
2	肖康		9	8	1.0	2.0
3	石琦		19	8	2.0	2.0
4	高利萍		1	0	0.0	0.0
5	武月章		4	0	0.0	0.0
6	杨雪花		1	0	0.0	0.0
7	陈冬冬		1	0	0.0	0.0