猪胸膜肺炎放线杆菌微滴数字PCR定量检测方法的建立

• 作者: 刘雨琦 叶蕾 常彦磊 李丽丽 石磊 陈洵
• 来源期刊: 现代食品科技
• 关键词: 猪胸膜肺炎放线杆菌 微滴数字PCR 检测方法
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 食品安全与检测
• 页码范围: 212-217
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2019.3.032

摘要

为实现对猪胸膜肺炎的致病菌猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的量化研究,本实验根据猪胸膜肺炎放线杆菌特异性基因ApxIV的保守序列,设计引物探针,通过优化反应条件,建立可对其准确定量的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)检测方法,并对该方法的特异性、灵敏度、稳定性以及适用性进行验证,与实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测方法进行比较分析.结果 表明:ddPCR最佳退火温度为52℃;线性相关系数(R2)为0.9957,线性关系良好;灵敏度达153.8 copies/μL,是qPCR的两倍;特异性良好,与其它常见猪病原无交叉反应.在实际样品检测中,110份样品的ddPCR与qPCR检测结果的Kappa系数为0.9529,说明两种检测方法结果高度一致,并且ddPCR可对qPCR无法判断阴阳性的可疑样本进行定量分析.本实验建立的ddPCR方法敏感性高、特异性强、可用于猪胸膜肺炎放线杆菌的定量检测.