金铁锁SSR-PCR反应体系的建立与优化

• 作者: 李文清 李斌 杨生超 胡小龙 董章宏 辛培尧 陈杰 高丽云
• 来源期刊: 云南农业大学学报（自然科学）
• 学科: 农学
• 关键词: 金铁锁 SSR-PCR 体系建立 优化
• 年，卷（期）: 2019,（6）
• 所属期刊栏目: 草业科学·药材
• 页码范围: 1024-1032
• 页数: 9页
• 分类号: Q943.2|S567.239
• 字数: 4806字
• 语种: 中文
• DOI: 10.12101/j.issn.1004-390X(n).201811017

摘要

[目的]建立和优化金铁锁SSR-PCR反应体系.[方法]以金铁锁嫩叶为试验材料,采用Ezup柱式植物基因组DNA抽提试剂盒、SDS法和CTAB法提取金铁锁DNA,并对提取结果进行比较.利用初筛并合成的20对金铁锁EST-SSR引物,对影响SSR-PCR体系的模板DNA、引物、Taq DNA聚合酶和dNTP用量这4个因素进行L16(44)正交实验,从而建立较为稳定的金铁锁SSR-PCR反应体系.[结果]试剂盒法提取得到的金铁锁DNA质量最好且符合SSR分子标记试验;在20对金铁锁EST-SSR引物中,有2对可用于SSR多态性分析;各因素对PCR扩增效果的影响程度为引物＞Taq DNA聚合酶＞模板DNA＞dNTP.试验最终确定的金铁锁SSR-PCR最佳反应体系(20 μL):1.0mL模板DNA(40 ng/μL)、1.5 μL引物(10 μmol/L)、0.3 μL dNTP(10 mmol/L)、0.3 μL Taq DNA聚合酶(5U/μL)以及2.0 μL 10×PCR Buffer(含Mg2+ 15 mmol/L),用ddH2O补足至总体积20μL.[结论]所建立的金铁锁SSR反应体系可为金铁锁不同种群的遗传变异研究及杂交育种时亲缘关系的分子鉴定提供前期研究基础.