稳定表达人源GRM4基因的乳腺癌细胞株的筛选及鉴定

• 作者: 孙朝晖 李林海 林志坚 肖斌
• 来源期刊: 实用癌症杂志
• 学科: 医学
• 关键词: GRM4 慢病毒载体 乳腺癌 稳定表达
• 年，卷（期）: 2019,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1050-1052,1056
• 页数: 4页
• 分类号: R737.9
• 字数: 2785字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5930.2019.07.002

摘要

目的 构建重组人源GRM4基因慢病毒载体,筛选稳定表达GRM4蛋白的乳腺癌MDA-MB-231细胞株.方法 PCR扩增GRM4基因片段,扩增产物连接到带有绿色荧光蛋白GFP的慢病毒栽体表达质粒中,构建重组荧光慢病毒质粒GFP-GRM4,同时以慢病毒空载体作为阴性对照组;将GFP-GRM4与包装质粒pMD2.G、psPAX2共转染293T包装细胞中,24h后观察荧光表达情况及被感染细胞的形态;48 h后收集病毒上清液,以病毒上清液感染乳腺癌MDA-MB-231细胞,利用嘌呤霉素抗性筛选稳定表达GRM4蛋白的细胞株;采用实时荧光定量PCR和Western blot方法检测细胞系中GRM4基因的转录及蛋白表达量.结果 DNA测序证实重组慢病毒质粒构建成功;重组慢病毒载体与包装质粒共转染293T细胞后,获得表达GRM4的重组慢病毒;乳腺癌MDA-MB-231细胞经慢病毒感染、药物筛选后,可在荧光显微镜下观察到明显的绿色荧光;实时荧光定量PCR和Western blot结果表明稳定表达株中GRM4表达水平显著高于对照组(P＜0.01).结论 成功构建了重组GRM4基因的慢病毒表达载体,筛选出稳定表达GRM4的人乳腺癌MDA-MB-231细胞株,为进一步明确GRM4在乳腺癌的发生发展中的作用机制奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林志坚		1	0	0.0	0.0
2	肖斌		2	1	1.0	1.0
3	孙朝晖		2	1	1.0	1.0
4	李林海		2	1	1.0	1.0