慢病毒介导的CCDC80基因敲除通过降低Aib1表达抑制卵巢癌细胞增殖

• 作者: 杨柳青 林仙德 潘巍巍 王卓文 石子晴 胡汉寅 郭燕君 钱若文轩 陈子彦
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: CCDC80基因 卵巢癌 细胞增殖 细胞凋亡 Aib1蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（5）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 777-783
• 页数: 7页
• 分类号: R737.31|R363.2
• 字数: 3995字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2019.05.002

摘要

目的:探讨含卷曲螺旋结构域蛋白80(coiled-coil domain-conaining protein 80,CCDC80)基因敲除对人卵巢癌ES-2细胞增殖和凋亡的影响.方法:慢病毒介导的CRISPR/Cas9技术敲除卵巢癌ES-2细胞中的CCDC80基因,基因组测序检测CCDC80的敲除效率;细胞增殖曲线、细胞划痕实验和软琼脂克隆形成实验检测CCDC80基因敲除对细胞增殖、迁移和克隆形成能力影响;Annexin V/PI染色和流式细胞术检测CCDC80基因敲除后细胞周期和凋亡的变化;Western blot法分析增殖相关蛋白表达量;裸鼠荷瘤模型体内实验研究CCDC80基因敲除对卵巢癌细胞增殖的影响.结果:DNA测序结果显示慢病毒介导的CRISPR/Cas9方法可以在卵巢癌ES-2细胞中敲除CCDC80基因.CCDC80基因敲除可以显著抑制细胞增殖、克隆形成和迁移能力(P<0.01).此外,CCDC80基因敲除可以减少G1期细胞数目,增加S和G2期细胞数,促进细胞凋亡(P<0.01).裸鼠体内研究显示,CCDC80基因敲除可以显著抑制ES-2细胞体内增殖(P<0.01),免疫组化结果显示CCDC80基因敲除细胞形成的肿瘤组织DNA损伤蛋白p-H2AX表达增加,而增殖标志物BrdU表达量减少.Western blot结果显示CCDC80基因敲除细胞p-histone H3表达量减少,p-ERK1/2表达增加(P<0.01).qPCR结果显示CCDC80基因敲除细胞中Aib1 mRNA表达显著降低(P<0.01).结论:CCDC80基因敲除抑制了ES-2细胞增殖,促进细胞凋亡,其机制可能与影响Aib1蛋白表达及MAPK信号通路有关.