GST pull-down结合质谱筛选猪圆环病毒2型ORF4潜在互作蛋白

• 作者: 周继勇 唐雯 廖敏 林翠 董伟仁 金玉兰 顾金燕
• 来源期刊: 生物工程学报
• 关键词: 猪圆环病毒2型 ORF4蛋白 GST pull-down 互作蛋白
• 年，卷（期）: 2019,（1）
• 所属期刊栏目: 动物及兽医生物技术
• 页码范围: 40-48
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13345/j.cjb.180098

摘要

猪圆环病毒2型编码的ORF4蛋白是近年来发现的新蛋白.迄今为止,人们对ORF4所参与的细胞生物学过程知之甚少.本研究首先构建了带双标签的真核表达载体pCMV-N-Flag-GST,再将ORF4基因插入该载体中,形成pCMV-N-Flag-GST-ORF4.将质粒转染293T细胞表达ORF4后,通过GST Pull-down试验捕获细胞内潜在与ORF4互作的蛋白库.经SDS-PAGE分离及银染后,对所得的特异性条带进行质谱鉴定,筛选出5个与ORF4潜在互作的蛋白,包括丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶6催化亚基、α心肌蛋白、β肌动蛋白、SEC-14样蛋白5和肌球蛋白myosin 9.上述研究结果为深入揭示ORF4在病毒感染细胞过程中发挥的作用提供新的思路与方向.