蓝舌病病毒和流行性出血病病毒双重荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用

• 作者: 何于雯 廖德芳 朱建波 李华春 李卓然 李占鸿 杨恒 杨振兴 谢佳芮
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 蓝舌病病毒 流行性出血病病毒 双重荧光定量RT-PCR
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 1104-1111
• 页数: 8页
• 分类号: S852.659.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0150

摘要

为建立检测蓝舌病病毒(BTV)和流行性出血病病毒(EHDV)的快速诊断方法,笔者根据BTV的第10基因节段(Seg-10)和EHDV的第5基因节段(Seg-5)序列,分别设计BTV与EHDV的特异性引物和TaqMan探针,经过反应条件优化,建立了同时检测两种病毒的双重荧光定量RT-PCR方法,并进行了特异性、灵敏度、重复性和临床样品检测验证.用该方法对BTV Seg-10和EHDV Seg-5节段的体外转录ssRNA为模板绘制标准曲线,相关系数(R2)均大于0.995,线性关系较好;该方法可检测不同血清型的BTV和EHDV,与阿卡斑病病毒(AKAV)、中山病病毒(CHUV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、口蹄疫病毒(FMDV)和牛流行热病毒(BEFV)无交叉反应,表明该方法特异性强;对2种标准品的检出极限均为10 copies/μL,比常规RT-PCR敏感性高10倍;组内和组间重复试验的变异系数均小于2％;用所建立的双重荧光定量RT-PCR方法及常规RT-PCR方法,对100份血液样品和50份病毒液分别进行检测,符合率均大于90％.以上结果表明所建立的双重荧光定量RT-PCR方法具有快速、准确、敏感和稳定等优点,为BTV和EHDV感染的早期快速诊断、高通量检测及流行病学调查提供了有效的技术方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李华春		72	264	8.0	11.0
2	朱建波		17	62	5.0	7.0
3	杨振兴		7	27	2.0	5.0
4	何于雯		12	8	2.0	2.0
5	廖德芳		33	131	7.0	10.0
6	李占鸿		8	0	0.0	0.0
7	李卓然		3	0	0.0	0.0
8	谢佳芮		4	5	1.0	2.0
9	杨恒		9	14	2.0	3.0