重组人烯醇酶-α的原核表达及生物信息学分析

• 作者: 刘思雨 王波 罗红
• 来源期刊: 基础医学与临床
• 学科: 医学
• 关键词: 烯醇酶-α 原核表达 生物信息学
• 年，卷（期）: 2019,（9）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1300-1304
• 页数: 5页
• 分类号: R34
• 字数: 2335字
• 语种: 中文

摘要

目的 通过原核表达技术获得人烯醇酶-α(ENO1)重组蛋白,并对表达产物进行生物信息学分析及抗体结合测定,为应用血清学检测技术进行肝纤维化早期诊断奠定基础.方法 根据GenBank中登录的ENO1序列(cDNA clone BC015641,MGC:23319 IMAGE:4643088),设计特异性引物,以ENO1的cDNA为模板,用PCR技术扩增ENO1序列,构建该基因的克隆载体pEASY-T1/ENO1及表达载体pET-32a(+)/ENO1,通过IPTG诱导表达重组蛋白rENO1.利用生物信息学相关软件(ProtParam、ProtScale、SignalP 4.1 server、Signal-3L、TMpred、DAS、NetPhos 2.0 Server)分析人ENO1蛋白的理化性质、信号肽、跨膜域及磷酸化位点等信息,并通过Western blot检测其与相应抗体的反应性.结果 成功构建重组质粒pEASY-T1/ENO1及表达载体pET-32a(+)/ENO1,构建的克隆质粒测序结果与GenBank中登录的ENO1序列的比对符合率为100％.获得的ENO1融合蛋白分子质量约为67 ku.该ENO1片段由434个氨基酸组成,其相对分子质量为47168.96,理论pI为7.01,是一种稳定的亲水性蛋白.该蛋白与相应抗体具有良好的反应性.结论 重组人烯醇酶-α 可以通过原核表达技术获得.获得的烯醇酶-α 融合蛋白片段为稳定的亲水性胞外蛋白,可以与相应抗体反应,为其作为相关标志物用于肝纤维化的早期快速诊断奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	罗红	大连医科大学检验医学院	41	207	8.0	13.0
2	王波	大连市中心医院检验科	22	206	9.0	14.0
3	刘思雨	大连医科大学检验医学院	13	17	3.0	3.0